1. 種屬來(lái)源要匹配：根據(jù)所用一抗選定二抗。一般來(lái)說(shuō)，如果一抗是小鼠原性，二抗應(yīng)選擇兔/山羊或其它種屬抗小鼠的抗體。目前，美國(guó)Vector公司和Zymed公司都有開(kāi)發(fā)的用小鼠抗體檢測(cè)小鼠組織的試劑盒，即一抗來(lái)源于小鼠，該試劑盒采用了通用非特異性封閉液和封閉內(nèi)源性小鼠Ig的封閉液，可以得到清晰的染色背景。

2. 注意抗體同種型和亞型：確定一抗同種型和亞型后，可以選擇抗一抗來(lái)源種屬?gòu)V譜Ig或針對(duì)一抗亞型的二抗。如一抗是小鼠IgG1, 可以選用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗。

3. 正確使用：也需要重新選擇稀釋比例。一般從供應(yīng)商提供稀釋比例的1/10稀釋度始，作5倍比稀釋。