在ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚，即加標本，加酶物，加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行濺起，不行發作氣泡。加標本通常用微量加樣器，按規則的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以發作穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液，再在其參加血清標本，然后在微型震動器上震動1分鐘以保證混和。加酶物使用液和底物用液時可用定量多道加液器，使加液進程迅速完結。在雙抗體夾心法測定抗原時，如使用對于抗原分子上兩個不一樣抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體。
ELISA試劑盒則在測守時可使標本的參加和酶標抗體的參加兩步并作一步。這種雙位點一步不光簡化了操作，縮短了反應時間，如使用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也明顯進步。單克隆抗體的使用使測定抗原的ELISA試劑盒進步到新水平。