X-gal

 

外觀：白色粉末
純度（HPLC）：>；；=99％
比旋光度：[&；alpha；]20D -62º；； ±；； 2 （c=1 in DMF/H2O 1:1）
水分：&；le； 1％
溶解性：清澈溶液（2％in DMF）
儲存：4℃ 避光避潮；長期存放-20℃
儲液配制：溶解100mg X -gal 于5 mL DMF中，分裝成1ml，用鋁箔包裝避光保存。
用途：X-Gal是&；beta；-半乳糖苷酶（&；beta；-galactosidase）的顯色底物，在&；beta；-半乳糖苷酶的催化下會產生藍色產物。常用于&；beta；-半乳糖苷酶的原位染色檢測以及藍白斑篩選。溶于DMSO，溶解度可達20mg/ml。也溶于DMF。
藍白斑篩選：
1）載體質粒和轉化受體菌株：
實驗所使用的載體質粒DNA為pBS,轉化受體菌為E. coli DH5&；alpha；菌株。E. coli DH5&；alpha；菌株帶有&；beta；-半乳糖苷酶C端部分序列的編碼信息。載體質粒DNA pBS上帶有&；beta；-半乳糖苷酶基因（lacZ）的調控序列和&；beta；-半乳糖苷酶N端146個氨基酸的編碼序列。（這個編碼區中插入了一個多克隆位點,但并沒有破壞lacZ的閱讀框架,不影響其正常功能。）
在各自獨立的情況下,pBS和DH5&；alpha；編碼的&；beta；-半乳糖苷酶的片段都沒有酶活性。但在pBS和DH5&；alpha；融為一體時可形成具有酶活性的蛋白質。
這種lacZ基因上缺失近操縱基因區段的突變體與帶有完整的近操縱基因區段的&；beta；-半乳糖苷酸陰性突變體之間實現互補的現象叫&；alpha；-互補。
2）實驗用顯色方法
實驗中使用X-gal（5-溴-4氯-3-吲哚-&；beta；-D-半乳糖苷）和IPTG（異丙基硫代-&；beta；-D-半乳糖苷）而非直接使用&；beta；-半乳糖。X-gal 以及 &；beta；-半乳糖均為 &；beta；-半乳糖苷酶底物，但是不能誘導&；beta；-半乳糖苷酶操縱子。實驗中使用IPTG以誘導&；beta；-半乳糖苷酶操縱子。在&；beta；-半乳糖苷酶作用下生成深藍色產物